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云芝多糖对实验性肝损伤抗氧化酶、自由基及一氧化氮含量的影响

[收录:2011-05-15] [作者:] [服务:论文代写代发] [字体: ]
内容摘要:                    作者:孙设宗,卢娟 官守涛,赵杰,张红梅 
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                     作者:孙设宗,卢娟 官守涛,赵杰,张红梅  

【摘要】     目的通过观察云芝多糖(CVP)对CCl4肝损伤抗氧化酶、自由基及NO含量的变化,探讨CVP抗肝损伤的作用机制。方法4月龄昆明种小鼠50只,分正常对照组、病理造模组、CVP保护组分高、中、低3组,常规饲料,自由饮水。CVP组每天按50,100,200 mg/kg体重的云芝多糖灌胃1次,饲养8 d,末次灌胃2 h,正常对照组腹腔注射调和油溶液,其余各组腹腔注射0.15%CCl4调和油溶液(10 ml/kg体重),12 h后禁食不禁水,18 h后处死小鼠,取出肝脏称重 计算 肝体指数;制备10%的肝匀浆,测定SOD,GSH-Px,NOS的活性和MDA,GSH,NO的含量。结果与模型组比较,CVP可降低肝体指数(P﹤0.05)和MDA的含量(P﹤0.001),提高抗氧化酶的活性和GSH含量(P﹤0.01),降低NOS活性和NO的含量(P﹤0.01)。结论 CVP可减轻肝损伤所致炎性反应,提高抗氧化酶的活性和GSH的含量,加速自由基的清除,降低NO的量,对实验性肝损伤有保护作用。

【关键词】   肝损伤 四氯化碳 自由基 一氧化氮

  Abstract:ObjectiveTo study the protective effect of Coriolus versciclor polysaccharides on CCl4-induced liver injury in rats through observing the contents of antioxidase, free radicals and NO. MethodsFifty Kunming mice of 4 months old were divided into control group, model group, groups treated with small, middle and large dose of CVP. Gastric perfusion was done with 50 mg/kg, 100 mg/kg and 200 mg/kg respectively everyday. Rats were given regular diet, free water for 8 days. 2 hours after the last gastric perfusion, mixed-edible-oil solution was injected for control group through belly cavity, other groups were treated with 0.15% CCl4 mixed with mixed-edible-oil(10 ml/kg). After 12 hours rats were absoluted diet and after 18 hours rats were sacrificed. The liver was taken out and weighed and the liver body index was calculated. 10% liver homogenate was prepared for test of the levels of SOD, GSH-Px, NOS, MDA, GSH and NO. ResultsCompared with model group, the liver body indexes of treatment groups were lowered(P<0.05), MDA content was decreased (P<0.01), antioxidase activity and GSH content were increased(P﹤0.01), and NOS activity and NO content were decreased(P﹤0.01). ConclusionCVP can eliminate inflammatory reaction of liver injury, increase antioxidase avtivity and GSH content, scavenge free radicals, decrease NO content, and protect from liver damage.

  Key words:Liver injury;  CCl4;  Free radicals;  NO

  一氧化氮(nitric oxide,NO)在肝细胞损伤中的作用已受到普遍关注,国内外研究表明NO对肝细胞既有保护作用又有细胞毒性和促进炎症的双重作用[1]。云芝多糖(Coriolus versciclor polysaccharides, CVP)具有增强免疫功能及较强的抗氧化作用[2~3],但云芝多糖对实验性肝损伤自由基及NO含量变化的报道极少,各种原因的肝损伤与自由基和NO的含量变化密切相关[4],本实验旨在用四氯化碳(CCl4)制备肝损伤模型,观察云芝多糖对实验性肝损伤所致抗氧化酶、自由基和NO含量的影响,以探讨云芝多糖抗肝损伤的作用机制。

   1  器材与方法

  1.1  动物、药品及试剂

  4月龄昆明种小鼠50只,由本院动物中心提供。丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)、一氧化碳合酶(NOS)检测试剂盒,购自南京建成生物工程研究所,云芝多糖购自神华药业有限公司,其余为国产分析纯生化试剂。

  1.2  仪器

  ZS83-1型内切式组织匀浆机(浙西机械厂),MDF-382E型超低温冰箱(日本Sony公司),722S型分光光度计(上海第二光学仪器厂),RA-50半自动生化分析仪(美国Technicon公司)。

  1.3 方法
 
  50只小鼠随机分为5组,每组10只,分正常对照组:常规饲料,饮自来水;病理造模组:常规饲料,饮自来水;云芝多糖保护组分高、中、低3组,常规饲料,自由饮水,按50,100,200 mg/kg体重云芝多糖灌胃,1次/d;饲养8 d,末次灌胃2 h,正常对组腹腔注射调和油溶液,其余各组腹腔注射0.15%CCl4调和油溶液(10 ml/kg体重),12 h后禁食不禁水,18 h后处死小鼠,取出肝脏置冰生理盐水中洗净血液,用滤纸吸去水分称重计算肝体指数;然后用pH 7.4的PBS按1∶10稀释冰浴下制备10%的匀浆,4 000 r/min离心5 min,取上清液用双缩脲法测肝匀浆中蛋白质含量,按试剂盒要求测MDA,GSH-Px,GSH,SOD,NOS,NO的含量。

  1.4  统计学处理 

  所得数据用SPSS 10.0软件进行方差分析,以P=0.05为检验标准。

   2  结果

  2.1  不同浓度云芝多糖对实验性肝损伤小鼠肝体指数和MDA含量的影响模型组肝体指数明显大于对照组(P﹤0.05),说明CCl4损伤模型组肝脏出现炎性病变,肝细胞肿大,肝体指数增加;不同浓度的CVP对CCl4肝损伤有保护作用,肝体指数降低与模型组比较(P﹤0.05)。病理模型组MDA明显升高,不同浓度的CVP均可降低MDA的含量,与模型组比较(P﹤0.001)。结果见表1。表1  不同浓度云芝多糖对实验性肝损伤小鼠肝体指数和MDA含量的比较 (略)

  2.2  不同浓度云芝多糖对实验性肝损伤小鼠SOD,GSH-Px活性和GSH含量的影响SOD和GSH-Px是生物体内清除自由基最重要的抗氧化酶,GSH是重要的还原当量,可有效地参与清除自由基,不同浓度的CVP可提高实验性肝损伤小鼠SOD,GSH-Px的活性和GSH的含量,且存在效-量关系,与模型组比较(P﹤0.05或P﹤0.01)。结果见表2。表2  云芝多糖对实验性肝损伤小鼠SOD,GSH-Px活性和GSH含量的比较(略)

  2.3   云芝多糖对实验性肝损伤小鼠NO的含量和NOS活性的影响CCl4肝损伤模型小鼠肝细胞NOS活性和NO的含量与对照组比较明显升高,云芝多糖能够降低实验性肝损伤小鼠肝细胞中NOS的活性和NO的含量,不同浓度的CVP保护组对NOS的活性和NO的含量存在效-量关系(P﹤0.05或P﹤0.01)。结果见表3。表3  云芝多糖对实验性肝损伤小鼠NO的含量和NOS活性的比较(略)

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